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由于多种原因导致假阴性率。2月22日，南京大学模型动物研究所发育生物学和遗传学教授赵庆顺在接受《科技日报》记者专访时指出，根据相关机构发布的指引，采集的样本在核酸检测前应在56℃灭活，这很可能会降解新冠状病毒的核酸，导致其无法正常检测，最终增加假阴性率。研究结果“病毒核酸提取前的高温灭活过程显著减少了可检测病毒核酸模板的数量”，已在中国科学院科技论文平台上预发布。
56℃灭活可能导致病毒核酸降解。
2019新型冠状病毒的遗传物质是单链核糖核酸因此，研究人员的目标是在患者体内发现新冠状病毒的核糖核酸。这也是临床诊断的黄金标准
目前，临床检测主要采用荧光定量逆转录聚合酶链反应试剂盒进行检测该方法包括以下步骤:样品中特定核糖核酸序列的逆转录和扩增；经过30次以上的扩增，当病毒基因片段达到一定数量时，可以进行视觉检测
“理论上，即使模板中只有一种病毒，也有可能检测到它。”赵庆顺说，在科研实践中，当模板(病毒)数量超过100个时，扩增结果会非常稳定。
，然而，赵庆顺在网上看到一段教学视频，又不禁担心起来。该视频由北京协和医院和北京市卫生委员会联合制作视频显示从3分08秒到3分40秒:在制备核酸模板之前，收集的样品应在56℃灭活30分钟记者
还在中华医学会实验医学分会发布的《2019年新型冠状病毒临床实验室检测生物安全保护指南(试行第一版)》中看到，样本在核酸扩增前可以进行消毒包括在56℃孵育30分钟，加入蛋白酶k
中华医学会实验医学分会发表的《新型冠状病毒核酸检测专家共识》明确指出，样品应在56℃下孵育至少45分钟或更长时间进行灭活。记者
通过采访证实，绝大多数检测人员在制备核酸模板前，根据上述规范在56℃不同时间灭活病毒。
的问题是病毒核糖核酸很容易被核糖核酸酶降解，因为这种酶在60℃时活性最高核糖核酸酶来自两个来源，一个是样品细胞内部，另一个是收集、保存和运输过程中的外来污染物。为了生物安全，
被灭活。
”被灭活，以保护从事检测的工作人员免受病毒感染”赵青顺说道
正是基于这种考虑，国家卫生安全委员会发布的相关文件明确要求对标本进行灭活
北京协和医院制作的教学视频和中华医学会检验医学分会发布的《保护指南》和《专家共识》均基于国家卫生安全委员会的相关文件，包括《新型冠状病毒实验室生物安全指南(第二版)》和《新型冠状病毒实验室检测技术指南(第三版)》等。
但是，记者询问了国家卫生委员会的相关文件，这些文件没有具体说明病毒灭活的具体方法，只是一般要求:用可靠的方法对传染性物质或灭活后的活病毒进行核酸检测
赵庆顺进一步查阅了疾控中心、香港大学公共卫生学院和华大基因发布的核酸检测说明书，发现在56℃时没有失活
病毒核酸的降解对检测结果有多大影响？记者在采访中发现，对于这个问题，不同的人有不同的答案:
来自疾控部门、中华医学会检验医学分会和相关医院检验人员的意见，对检验结果影响不大。但是，赵庆顺等专家认为，核酸提取前人体样本的高温消毒可能是新冠状病毒核酸检测假阴性率高的重要原因之一。
赵庆顺以猪流行性腹泻病毒(一种来源于活疫苗的冠状病毒)为模型，研究了高温灭活对检出量的影响。结果表明，将样品在普通等渗溶液(汉克溶液)中于56℃孵育30分钟，样品中可检测到的冠状病毒模板减少了一半。如果在92℃孵育5分钟，可检测的冠状病毒模板损失超过96%理论上，
”并不排除新冠状病毒的靶核糖核酸片段在高于56℃的高温灭活过程中不容易降解的可能性”赵青顺坦率地说道，“但我宁愿我的判断是错误的，也不想因为一个细节考虑不周而造成假阴性的检测结果“
此外，不同品牌的样品保存溶液也会对测试结果产生较大影响赵庆顺在实验中发现，用南京诺和锐研发的R503保存液在56℃保存猪流行性腹泻病毒样品30分钟，病毒核酸的检出量是对照组(汉克溶液)的3倍。然而，如果在92℃灭活5分钟，检测量是对照组的42倍。中华医学会实验医学分会
主席王成斌教授在一篇文章中也针对核酸检测假阴性率高的问题指出，不同的提取试剂最终提取的核酸在数量和质量上可能存在差异，从而直接影响检测结果他建议，对于一些高度疑似病例或检测结果难以确定的病例，应使用2种以上的试剂进行检测和验证。
”假阴性意味着漏检，这不仅会导致临床实践中对疑似患者的快速诊断失败，还会使漏检成为病毒感染的潜在来源。赵庆顺为此提出了建议。一是尽可能使用没有核糖核酸酶污染的样品收集管。另一种方法是将样品置于样品保存溶液中，该溶液可保护病毒核酸免受高温灭活损伤，从而确保样品的核糖核酸完全不受保存、运输至高温灭活等的影响。，尽可能保证用于临床检测的核酸的质量，并减少核酸提取前对病毒核酸可检测模板的人为破坏。
